遺伝情報とその発現(知識)の問題
大腸菌の DNA 複製のしくみを調べるために、次の実験 1〜3 を行った。チミジンは DNA の材料としてだけ取りこまれるものとする。どの実験でも、取り出した DNA は加熱して 1 本鎖にほどいてから長さで分け、短い鎖(約 1000〜2000 ヌクレオチド)と長い鎖のそれぞれに含まれる放射能の量を調べた。
- 実験 1:野生型の大腸菌に、放射性同位体で標識したチミジンを 10 秒間だけ与えた直後に DNA を取り出した。
- 実験 2:野生型の大腸菌に、実験 1 と同じように標識したチミジンを 10 秒間与えたあと、標識していない(放射性でない)チミジンを多量に含む培地に移して 5 分間培養し、DNA を取り出した。
- 実験 3:ある 1 種類の酵素の遺伝子に変異があり、高温ではその酵素だけがはたらかなくなる変異株を用いた。この変異株を高温で培養しながら、実験 2 と同じ操作を行った。
結果は次の表のようになった。どの実験でも、DNA に取りこまれた放射能の総量はほぼ同じであった。
| 実験 | 菌株 | 短い鎖の放射能 | 長い鎖の放射能 |
|---|---|---|---|
| 1 | 野生型 | 多い | 少ない |
| 2 | 野生型 | ほとんどない | 多い |
| 3 | 変異株(高温) | 多い | 少ない |
実験 1〜3 の結果と DNA の複製のしくみについて述べた文として最も適当なものを、次のア〜オから 1 つ選べ。
- ア 実験 1 で短い鎖として検出された新生鎖は、実験 2 の 5 分間のうちに分解され、長い鎖はそのあいだに新しく別に合成されたものである。
- イ 短い新生鎖どうしをつなぐには DNA リガーゼのはたらきが必要であり、DNA リガーゼがはたらかないと、新生鎖の一部は短い断片のまま残る。
- ウ 短い新生鎖は、DNA ポリメラーゼが新生鎖を 3′ 末端から 5′ 末端の方向へ伸ばすことでつくられる。
- エ 実験 3 の変異株では、高温で DNA ポリメラーゼがはたらかなくなるため、新しい DNA 鎖が合成されない。
- オ 短い新生鎖は、複製フォークが進む方向と同じ向きに連続して合成される鎖(リーディング鎖)でつくられる。
この問題で使うもの
- DNA の複製のしくみ(説明と入口の問題)
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ヒント
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ヒント 1
標識したチミジンを短時間だけ与え、その後に標識していないチミジンで追いかける実験(パルス・チェイス)では、標識がどの分子からどの分子へ移ったかを追える。この考え方と、DNA 複製にはたらく酵素の知識を使う。
ヒント 2
実験 2 の 5 分間につくられた部分は放射能をもたない。長い鎖に放射能が現れたのは、実験 1 の短い鎖がどうなったからか考えよう。また、DNA ポリメラーゼは新生鎖を 5′→3′ 方向にしか伸ばせない。
ヒント 3
実験 3 では放射能の総量が野生型と同じなので、DNA の合成は起こっている。これで エ は除ける。ア は実験 2 と矛盾する。ウ は伸長の向きが、オ は鎖の名前が教科書の事実と合わない。残る選択肢を、DNA 鎖どうしをつなぐ酵素と結びつけて確かめよう。
答えと解説
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イ
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解説を読む
実験の読み取り
- 実験 1(標識を与えた直後)では、新しく合成された DNA 鎖(放射能をもつ鎖)の多くが短い鎖として見つかる。新生鎖の一部は、まず短い断片としてつくられることがわかる。
- 実験 2 では、標識したチミジンを与えたのは最初の 10 秒間だけである。その後の 5 分間に合成された部分には放射能がない。それでも放射能が短い鎖から長い鎖へ移っている。したがって、長い鎖の放射能は、実験 1 で見られた短い断片がつながれて長い鎖になったことによると考えられる(パルス・チェイス実験)。
- 実験 3 では、放射能の総量が野生型とほぼ同じなので、DNA の合成そのものは起こっている。しかし、5 分後も放射能が短い鎖に残っている。変異株では、短い断片をつなぐ酵素がはたらいていないと考えられる。教科書の知識から、DNA 鎖どうしをつなぐ酵素は DNA リガーゼである。
この短い断片は岡崎フラグメントとよばれる。DNA ポリメラーゼは新生鎖を 5′→3′ 方向にしか伸ばせない。そのため、複製フォークの進行方向と逆向きに合成されるラギング鎖は、短い断片として不連続に合成され、あとで DNA リガーゼによってつながれる。
各選択肢の検討
- ア:誤り。実験 2 の 5 分間に与えたチミジンは標識されていない。新しく別に合成された長い鎖であれば放射能をもたないはずである。長い鎖に放射能が移ったのは、標識された短い断片がつながれたためである。
- イ:正しい。実験 3 で、DNA の合成は起こるのに短い断片がつながらないことと、DNA リガーゼのはたらきに合っている。
- ウ:誤り。DNA ポリメラーゼは、新生鎖を 5′ 末端から 3′ 末端の方向にしか伸ばせない。3′→5′ 方向とした点が誤りである。
- エ:誤り。実験 3 でも放射能の総量は野生型とほぼ同じで、短い新生鎖は合成されている。DNA ポリメラーゼははたらいており、はたらかなくなったのは断片をつなぐ酵素である。
- オ:誤り。短い断片(岡崎フラグメント)がつくられるのは、複製フォークの進行方向と逆向きに不連続に合成されるラギング鎖である。リーディング鎖は連続して合成される。
よって答えは イ である。
別解
実験1:短時間の標識では、合成されたばかりの新生鎖が標識される。短い鎖(岡崎フラグメント)に多く含まれることから、ラギング鎖が短い断片として不連続に合成されることがわかる。
実験2:標識しないチミジンで追跡すると、標識された短い鎖がほとんど消え、長い鎖に放射能が移る。短い断片が DNA リガーゼで連結されて長い鎖になったことを示す。
実験3:1種類の酵素が働かないと、追跡しても短い鎖のまま残る。断片をつなぐ DNA リガーゼの欠損と考えられる。
各選択肢:
ア:誤り。短い鎖は分解されるのではなく連結されて長い鎖になる。放射能の総量がほぼ同じであることとも合わない。
イ:正しい。岡崎フラグメントをつなぐのは DNA リガーゼで、これがはたらかないと断片のまま残る。
ウ:誤り。DNA ポリメラーゼは新生鎖を 5′→3′ 方向にしか伸ばせない。
エ:誤り。DNA ポリメラーゼが働かなければ、実験1のように短い鎖が多く合成されることもない。実験3では短い鎖が合成されているので、新生鎖の合成は起こっている。
オ:誤り。短い鎖はリーディング鎖ではなくラギング鎖で、フォークの進行方向と逆向きに不連続に合成される。
答えは イ。