遺伝情報とその発現(知識)の問題
アンピシリン耐性遺伝子をもつプラスミドに、オワンクラゲの緑色蛍光タンパク質(GFP)の遺伝子を組み込み、組換えプラスミド Q をつくった。GFP 遺伝子は、アンピシリン耐性遺伝子とは別の位置に、大腸菌の中で発現できるように組み込まれている。用いた大腸菌は、アンピシリン耐性をもたず、GFP の遺伝子ももたない。
この大腸菌を次の 2 通りに処理した。
- 処理 1:大腸菌を Q と混ぜ、プラスミドを取り込みやすくする操作を行った。
- 処理 2:大腸菌を Q と混ぜずに、処理 1 と同じ操作を行った。
それぞれの大腸菌の液を、アンピシリンを含まない培地 A と、アンピシリンを含む培地 B に同じ量ずつまいて培養した。その後、生じたコロニーの数を数え、紫外線を当てて緑色の蛍光を発するかどうかを調べた。結果は次の表のとおりであった。
| 培地 A(アンピシリンなし) | 培地 B(アンピシリンあり) | |
|---|---|---|
| 処理 1 | 約 1000 個。そのうち約 20 個だけが蛍光を発し、残りは発しなかった | 約 20 個。すべて蛍光を発した |
| 処理 2 | 約 1000 個。すべて蛍光を発しなかった | 0 個 |
この実験の結果から考えられることとして最も適当なものを、次のア〜オのうちから 1 つ選べ。
- ア 処理 1 の培地 B にコロニーが生じたのは、アンピシリンにさらされたことで、大腸菌の DNA にアンピシリン耐性遺伝子が新たに生じたからである。
- イ 処理 1 の培地 A で蛍光を発しないコロニーが多かったのは、Q を取り込んだ大腸菌の多くで GFP 遺伝子が転写されなかったからである。
- ウ 処理 2 の培地 A にコロニーが生じたことから、用いた大腸菌はもともとアンピシリン耐性をもっていたと考えられる。
- エ Q を取り込んだ大腸菌は全体のごく一部であり、アンピシリンを含む培地を用いると、Q を取り込んだ大腸菌を選び出すことができる。
- オ 処理 1 の培地 A で蛍光を発したコロニーの大腸菌は、Q をもたず、自分の DNA に GFP 遺伝子をもっていたと考えられる。
この問題で使うもの
- 制限酵素・ベクターと遺伝子組換え(説明と入口の問題)
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ヒント
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ヒント 1
プラスミドをベクターとして大腸菌に遺伝子を導入するとき、アンピシリン耐性遺伝子がどんな役割をもつかを思い出そう。
ヒント 2
アンピシリンを含む培地で増殖できるのは、どの大腸菌か。処理 2 の培地 B が 0 個であることと、処理 1 の培地 B のコロニーがすべて光ったことを合わせて考えよう。
ヒント 3
処理 1 の培地 A で光ったコロニー数(約 20 個)と、培地 B のコロニー数(約 20 個)がほぼ同じである。ここから、Q を取り込まなかった大腸菌がどのくらいいるかを考えれば、ア・ウ・オはもとの大腸菌の性質から、イは培地 B の結果から否定できる。
答えと解説
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エ
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解説を読む
結果の読み取り
処理 2(Q なし)の大腸菌は、培地 A では増えるが培地 B では増えない。したがって、もとの大腸菌はアンピシリン耐性をもたない。
処理 1 の培地 B では約 20 個のコロニーが生じ、すべて蛍光を発した。アンピシリンの中で増殖できるのは、アンピシリン耐性遺伝子をもつ Q を取り込んだ大腸菌だけである。その大腸菌がすべて光ったことから、Q を取り込んだ大腸菌では GFP 遺伝子が発現しているとわかる。
処理 1 の培地 A では、Q をもつ大腸菌ももたない大腸菌も増殖できる。約 1000 個のうち光ったのは約 20 個で、培地 B のコロニー数とほぼ同じである。つまり、Q を取り込んだのは全体のごく一部で、光らない大部分のコロニーは Q を取り込まなかった大腸菌である。
このように、ベクター(プラスミド)にアンピシリン耐性遺伝子などの目印になる遺伝子をのせておくと、抗生物質を含む培地で培養することで、プラスミドを取り込んだ大腸菌だけを選び出せる。よって エ が正しい。
ほかの選択肢が誤りである理由
- ア:アンピシリンが耐性遺伝子をつくり出すわけではない。耐性遺伝子は Q によって外から持ち込まれたものである。処理 2 の培地 B にコロニーが生じなかったことからも、アンピシリンにさらしただけでは耐性は生じないとわかる。
- イ:培地 B の結果から、Q を取り込んだ大腸菌はすべて光っている。したがって、Q をもつ大腸菌では GFP 遺伝子が発現している。培地 A で光らないコロニーが多いのは、大部分の大腸菌が Q を取り込まなかったからである。
- ウ:処理 2 の培地 B(アンピシリンあり)にはコロニーが生じていない。もとの大腸菌はアンピシリン耐性をもたない。培地 A はアンピシリンを含まないので、耐性がなくても増殖できる。
- オ:用いた大腸菌はもともと GFP 遺伝子をもたない(処理 2 ではまったく光らない)。処理 1 で光ったコロニーは、Q を取り込んで GFP 遺伝子を得た大腸菌である。
別解
結果の整理:処理2(Qなし)では、培地Aに約1000個のコロニーが生じ、すべて蛍光なし。培地Bには0個。したがって用いた大腸菌はアンピシリン耐性をもたず、GFP遺伝子ももたない。処理1では、培地Aに約1000個のうち約20個だけが蛍光を発し、培地Bには約20個が生じてすべて蛍光を発した。したがってQを取り込んだ大腸菌は全体の約2%で、アンピシリン耐性と蛍光の両方を示す。
各選択肢の検討:
ア:誤り。耐性遺伝子はQに含まれていたもので、アンピシリンにさらされて新たに生じたのではない。処理2の培地Bでは0個なので、突然変異で耐性になった様子もない。
イ:誤り。Qを取り込んだ大腸菌は培地Bで生じた約20個で、すべて蛍光を発した。培地Aで蛍光を発したのも約20個で、Qを取り込んだ大腸菌はほぼすべて蛍光を発している。蛍光なしのコロニーが多いのは、Qを取り込まなかった大腸菌が大部分だからである。
ウ:誤り。処理2の培地Aはアンピシリンを含まないので、コロニーが生じても耐性の有無はわからない。処理2の培地Bで0個なので、耐性はもたない。
エ:正しい。Qを取り込んだ大腸菌は約1000個中約20個とごく一部である。アンピシリン培地ではQを取り込んだ大腸菌だけが増殖でき、これを選び出せる。
オ:誤り。処理2で蛍光を発したものはなく、もとの大腸菌はGFP遺伝子をもたない。蛍光を発した大腸菌はQをもつ。
以上より、答えはエ。