遺伝情報とその発現(知識)の問題
ヒトのインスリンを大腸菌につくらせたい。ヒトの細胞の核から取り出した DNA のうち、インスリン遺伝子の領域をそのままプラスミドに組み込んで大腸菌に導入しても、正しいアミノ酸配列をもつインスリンはつくられない。
そこで、インスリンをさかんに合成しているヒトのすい臓の細胞から mRNA を抽出し、これを鋳型として逆転写酵素を用いて DNA を合成する。さらにこの DNA を 2 本鎖にしてプラスミドに組み込み、大腸菌に導入すると、正しいアミノ酸配列をもつインスリンがつくられる。
このように、mRNA を鋳型として逆転写酵素によって合成される DNA を何というか。
この問題で使うもの
- 制限酵素・ベクターと遺伝子組換え(説明と入口の問題)
この問題を解けるようになるまで(45 技能)
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- DNA の構造と相補性
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- 転写と翻訳のしくみ
- 生物の共通性と原核細胞・真核細胞
- 原核生物と真核生物の遺伝子発現のちがい
- 制限酵素・ベクターと遺伝子組換え
ヒント
行き詰まったら、上から順に 1 つずつ開いてください。
ヒント 1
真核生物の遺伝子の構造と、遺伝子が発現するまでの過程で起こることを思い出そう。大腸菌(原核生物)にはないしくみがある。
ヒント 2
核の DNA の遺伝子にはイントロンが含まれるが、細胞から取り出した mRNA はスプライシングによってイントロンがすでに除かれている。この mRNA をもとに DNA をつくれば、エキソンだけに対応する DNA が得られる。
ヒント 3
この DNA は、鋳型にした mRNA の塩基配列との関係(塩基どうしが対をつくる関係)を表すことばで名づけられており、アルファベット 1 文字と DNA を組み合わせた略称でもよく呼ばれる。
答えと解説
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cDNA
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解説を読む
真核生物の遺伝子には、エキソンのほかに、mRNA 前駆体から取り除かれるイントロンが含まれている。真核細胞では、転写によってできた mRNA 前駆体からスプライシングによってイントロンが除かれ、エキソンだけがつながった mRNA ができてから翻訳される。しかし、原核生物である大腸菌はスプライシングのしくみをもたないため、核から取り出した DNA の遺伝子領域をそのまま導入すると、イントロンの部分まで含んだ RNA が翻訳されてしまい、正しいアミノ酸配列のタンパク質ができない。
そこで、すでにスプライシングを受けてイントロンが除かれた mRNA を細胞から取り出し、RNA を鋳型として DNA を合成する酵素である逆転写酵素を用いて DNA を合成する。こうしてつくられる DNA は、mRNA の塩基配列に相補的な塩基配列をもつので、cDNA(相補的 DNA) という。cDNA はエキソンの部分だけに対応しているので、2 本鎖にしてプラスミドなどのベクターに組み込み大腸菌に導入すれば、正しいアミノ酸配列のタンパク質を合成させることができる。
似た用語との違い:
- 逆転写酵素: cDNA を合成するはたらきをもつ酵素の名前であり、合成された DNA の名前ではない。
- ベクター: 目的の DNA を宿主細胞に運び入れるための DNA(プラスミドなど)で、cDNA を組み込む側である。
- 核から取り出した DNA(ゲノム DNA): イントロンを含んでおり、cDNA とは異なる。
よって答えは cDNA(相補的 DNA)である。
別解
真核生物の遺伝子は、転写されたあとにスプライシングでイントロンが取り除かれて mRNA になる。核の DNA をそのまま大腸菌に導入してもイントロンが含まれるため、大腸菌(原核生物でスプライシングを行わない)では正しいタンパク質はつくられない。一方、mRNA はスプライシング済みでイントロンを含まないので、これを鋳型に逆転写酵素で合成した DNA(イントロンをもたない)を用いれば、正しいアミノ酸配列のインスリンをつくらせることができる。mRNA を鋳型として逆転写酵素によって合成される DNA は、相補的 DNA(cDNA)とよばれる。