遺伝情報とその発現の問題
窒素源として のみを含む培地で大腸菌を何世代も培養し、DNA に含まれる窒素をすべて にした。この大腸菌を、窒素源として のみを含む培地に移して培養を続けた。何回か分裂したところで大腸菌の一部を取り出し、DNA を抽出して塩化セシウム溶液中で密度勾配遠心法により分離した。その結果、DNA は「中間の密度のバンド」と「軽い( のみを含む)DNA のバンド」の 2 本に分かれ、それぞれに含まれる DNA の分子数の比は
であった。
この時点で残りの大腸菌を、窒素源として のみを含む培地にふたたび移し、さらに 2 回分裂させた。その後、同様に DNA を抽出して密度勾配遠心法で分離したとき、「重い( のみを含む)DNA」と「中間の密度の DNA」の分子数の比を、最も簡単な整数比で、重い:中間 の順に求めよ。
ただし、DNA は半保存的に複製されるものとする。また、大腸菌はすべて同調して分裂し、1 回の分裂ごとに DNA は 1 回だけ複製されるものとし、大腸菌 1 個の DNA は 1 分子として扱う。新しく合成されるヌクレオチド鎖の窒素は、すべてそのときの培地の窒素に由来するものとする。
この問題で使うもの
- 半保存的複製と世代ごとの DNA の割合(説明と入口の問題)
この問題を解けるようになるまで(43 技能)
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- DNA の複製のしくみ
- 半保存的複製と世代ごとの DNA の割合
ヒント
行き詰まったら、上から順に 1 つずつ開いてください。
ヒント 1
まず最初の遠心結果(中間:軽い )から、 培地で何回分裂したかを求めよう。半保存的複製では、もとの鎖は必ずどれかの分子に 1 本ずつ残る。
ヒント 2
回分裂後、もとの 1 分子からできる 分子のうち中間の DNA は 2 分子、軽い DNA は 分子。また、 培地に戻した後は新しい鎖がすべて になるので、 鎖の本数は増えない。
ヒント 3
より 。この時点で DNA は 8 分子、 鎖は 14 本ある。 培地で 2 回分裂後は 32 分子になり、 鎖はそれぞれ別の分子に 鎖と対になって入っている。
答えと解説
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解説を読む
1. 培地での分裂回数を求める
はじめの DNA 1 分子( 鎖 2 本)に注目する。半保存的複製では、もとの鎖は壊れずに必ずどれかの DNA 分子に 1 本ずつ受け継がれ、新しい鎖は でつくられる。
培地で 回分裂すると、DNA は 分子になる。このうち 鎖を含むのは、もとの 鎖 2 本がそれぞれ入っている 2 分子だけで、これらは 鎖と 鎖からなる中間の DNA である。残りの 分子は軽い DNA である()。
中間:軽い より
よって、 培地で 3 回分裂した時点で、もとの 1 分子あたり DNA は 8 分子(中間 2 分子、軽い 6 分子)である。ヌクレオチド鎖で数えると、全部で 本のうち 鎖が 2 本、 鎖が 本である。
2. 培地で 2 回分裂させる
培地では、新しく合成される鎖はすべて 鎖である。2 回分裂すると DNA は 分子(鎖は 本)になる。
鎖はもう新しくつくられないので、 鎖は 14 本のままである。半保存的複製では、古い鎖は複製のたびに新しい鎖( 鎖)と対になって別々の分子に分かれる。 培地での 1 回目の複製で、すでに 2 本の 鎖が同じ分子に入ることはなくなり、以後も同じである。したがって 14 本の 鎖はそれぞれ別の分子に 1 本ずつ入り、いずれも相手の鎖は 鎖である。
- 中間の DNA( 鎖 1 本 + 鎖 1 本): 分子
- 軽い DNA: 分子
- 重い DNA( 鎖のみ): 分子
(確認:分子ごとに追うと、 培地での 1 回目の分裂で、中間 2 分子 → 重い 2・中間 2、軽い 6 分子 → 中間 12 となり、重い 2・中間 14 になる。2 回目の分裂で、重い 2 → 重い 4、中間 14 → 重い 14・中間 14 となり、重い 18・中間 14 で一致する。)
3. 比を求める
別解
手順を追って考える。
【1段階目】 の DNA(重・重)を 培地に移し、 回分裂させる。
分裂 回後の DNA 分子数は 本。このうち、中間(N 鎖 1 本と N 鎖 1 本)は常に 2 本で、残りは軽い(N のみ)。
中間:軽い より 、、。
つまり 3 回分裂後で、DNA は 8 本、中間 2 本、軽い 6 本。重いものは 0 本。
【2段階目】これを 培地に移して 2 回分裂させる。DNA 1 分子ごとに 4 本に増える。新しい鎖はすべて N。
(1) 軽い DNA(N/N)1 分子から:
1 回目の複製で、中間(N 鎖 + N 鎖)が 2 本できる。
2 回目の複製で、各中間から、中間(N 鎖 + 新 N 鎖)1 本と重い(N/N)1 本ができる。
よって 4 本中、中間 2 本、重い 2 本。軽い DNA 6 本からは、中間 12 本、重い 12 本。
(2) 中間 DNA(N 鎖 + N 鎖)1 分子から:
1 回目の複製で、N 鎖を鋳型にした中間 1 本と、N 鎖を鋳型にした重い 1 本ができる。
2 回目の複製で、中間は中間 1 本(N 鎖を含む)と重い 1 本になる。重いは重い 2 本になる。
よって 4 本中、中間 1 本、重い 3 本。中間 DNA 2 本からは、中間 2 本、重い 6 本。
(3) 合計:
重い 本、中間 本、軽い 0 本。合計 32 本。
これは と一致する。
重い:中間 。
【検算】全 DNA 鎖は 64 本。このうち N 鎖は元の 8 本の DNA に含まれていた 6×2+2=14 本で、複製しても N 鎖は増えない。中間 14 本が各 1 本の N 鎖を持ち、合計 14 本。一致する。